Tripsinizacija yra ląstelių disociacijos procesas, naudojant tripsiną – proteolitinį fermentą, kuris skaido b altymus, kad atskirtų prilipusias ląsteles nuo indo, kuriame jos auginamos. Įdėjus į ląstelių kultūrą, tripsinas suskaido b altymus, kurie leidžia ląstelėms prilipti prie kraujagyslės.
Kodėl mes tripsinizuojame ląsteles?
Tripsinizacija dažnai atliekama siekiant leisti ląstelėms patekti į naują talpyklą, stebėti eksperimentams arba sumažinti susiliejimo laipsnį kolboje pašalinant procentą ląstelės.
Kaip tripsinas atskiria ląsteles?
Tripsinas/EDTA yra kombinuotas ląstelių atskyrimo metodas. Tripsinas sumažina sukibimo b altymus sąveikaujant ląstelėms ir ląstelėms ir matricoms, sumažindamas adhezinių b altymų aminorūgštis konkrečiai lizinu arba agininu C-gale, jei prieš srovę esanti aminorūgštisnėra prolinas.
Kaip gauti tripsinizuotas prilipusias ląsteles?
Procedūra
- Išimkite terpę iš auginimo indo nusiurbdami ir nuplaukite monosluoksnį druskos tirpalu, kuriame nėra Ca2+ ir Mg 2+, kad pašalintumėte visus serumo pėdsakus. …
- Į kultivavimo indą (-ius) išpilstykite pakankamai tripsino arba tripsino/EDTA tirpalo, kad visiškai uždengtumėte vienarūšį ląstelių sluoksnį, ir įdėkite į 37 °C inkubatorių ~2 minutėms.
Kaip išjungti tripsiną ląstelių kultūroje?
Kai langeliai bus atskirti, pridėkite 2 tomusiš anksto pašildytos pilnos auginimo terpės, kad inaktyvuotų tripsino. Švelniai paskirstykite terpę kelis kartus pipete perbraukdami per ląstelės sluoksnio paviršių, kad užtikrintumėte >95% ląstelių atkūrimą. Kultūroms be serumo, sojų pupelių tripsino inhibitorius (produkto Nr.
