Inkubuokite indą kambario temperatūroje 2–3 minutes . Tvirtai prilipusias ląsteles galima greitai atskirti esant 37 °C. Stebėkite ląsteles po mikroskopu. Atskilusios ląstelės mikroskopu atrodo suapvalintos ir lūžtančios.
Kas atsitiks, jei per ilgai trypsinuosite ląsteles?
Per ilgai inkubuojant ląsteles su per didele tripsino koncentracija pažeis ląstelių membranas ir ląsteles žudys. Jei nesate tikri dėl naudotino tripsino koncentracijos, naudokite mažą koncentraciją.
Kaip tripsinizuojate ląsteles?
Ląstelės gali būti resuspenduojamos švelniai pipete supilant ląstelių suspensiją, kad suskaidytų gumulėlius. Jei reikia, galima papildomai skiesti ląstelių skaičių ir (arba) subkultūrą.
Kiek laiko užtrunka, kol ląstelės prisitvirtina?
pirmosios ląstelės prisitvirtina jau po 3-5 min! Mano patirtis rodo, kad dauguma EC buvo pritvirtinti po 10-20 min. Tačiau kuo ilgiau lauki, tuo tvirtesnis prisirišimas.
Ar blogai tripsinizuoti ląsteles dvi dienas iš eilės?
Taip, kenkia, jei ląsteles tripsinizuojate nuolat po 24 val. padalijimo. Patartina skaidyti po 48 valandų. … Galite išlaikyti ląsteles tol, kol morfologija bus gera (tai priklauso nuo jūsų ląstelės tipo, kai kurios ląstelės gali praeiti iki 80, o kai kurios iki 10).