Kai ląstelės atsiskiria, pridėkite 2 tūrius iš anksto pašildytos pilnos auginimo terpės, kad inaktyvuotumėte tripsiną. Švelniai paskirstykite terpę kelis kartus pipete perbraukdami per ląstelės sluoksnio paviršių, kad užtikrintumėte >95 % ląstelių atkūrimą.
Kaip sustabdyti tripsino veiklą?
Tripsino virškinimą galima sustabdyti užšaldant arba sumažinus reakcijos pH žemiau pH 4, pridedant skruzdžių, acto arba trifluoracto rūgšties (tripsinas atgaus aktyvumą, kai pH pakeltas virš pH 4). Suvirškintus mėginius galima laikyti -20°C temperatūroje.
Kas neutralizuoja tripsiną?
Buferis turintis kalcio ir magnio jonų taip pat sulėtins tripsino aktyvumą. Tačiau FBS yra veiksmingesnis būdas slopinti tripsino aktyvumą.
Ar serumas inaktyvuoja tripsiną?
Serumas inaktyvuoja tripsino likutį, likusį po fermentinio inkstų virškinimo ir proteolitinių fermentų, kuriuos vėliau sintetina ląstelės. Šviežiai tripsinizuotas ląsteles galima išauginti iki vienasluoksnių sluoksnių be serumo, jei jos buvo pakartotinai plaunamos, kad būtų pašalintas tripsino likutis.
Kiek terpės reikia norint išjungti tripsiną?
Kol jūs naudojate bent 1:1 santykiu 5-10% serumo turinčią terpę su tripsinu, slopinimas turėtų būti daugiau nei pakankamas, o po to centrifuguojama. ir terpės keitimas šviežia terpe.
